当归红芪超滤物对辐射致新生大鼠心肌细胞氧化

放射性心脏疾病一般是指心脏受到放射性物质辐射后而发生的一类损伤性病变，随着放射性治疗在恶性肿瘤中的广泛应用，放射性心脏疾病的临床报告逐渐增多，患者主要临床表现为心律失常、心包炎、心肌纤维化及心肌梗死等，目前仍无有效的治疗手段，给患者的身心健康造成极大影响〔1,2〕。随着中医临床研究的不断发展，研究发现当归、红芪等中药具有抗氧化损伤及抗辐射等作用〔3,4〕，本研究通过观察当归红芪超滤物对辐射后乳鼠心肌组织氧化应激和炎性因子相关指标的影响，为放射性心脏疾病的发生机制及中医治疗提供依据。

1 材料和方法

1.1实验材料

1.1.1实验动物 选择1～3日龄的Wistar大鼠10只作为实验动物，雌雄不限，体重6～10 g，由甘肃中医药大学动物实验中心提供。

1.1.2实验药物 当归红芪超滤物的制备过程〔5〕：当归和红芪饮片按照1∶5的比例进行混合，水煎煮3次后，过滤杂质并加热浓缩，冷却至室温后使用陶瓷膜微滤当归红芪水煎剂浓缩液，具体技术参数：压力0.5 kPa/m3、温度25 ℃、流量100 L/(h·m3)，选用截留相对分子量为1×105PNA的中空纤维超滤膜对微滤后的浓缩液进行超滤处理，具体技术参数：膜面积0.25 m2、系统压力≤5.0 bar、过滤能力 2～30 L/h，最后将浓缩超滤液喷雾干燥成粉末，分装置于干燥器中备用。

1.2实验方法

1.2.1心肌细胞原代培养 无菌条件下取Wistar大鼠心尖部组织，使用预冷的磷酸盐缓冲液(PBS)漂洗3次，将心肌组织剪成约1 mm3大小后移入离心管中，加入0.08%胰蛋白液进行反复吹打，动作要轻柔，然后置于37℃水浴消化10 min，弃去上清液，再加入0.08%胰蛋白液和0.05%胶原酶，反复吹打后置于37℃水浴消化8 min，取上清液移入新离心管中，加入等体积含15%新生牛血清的DMEM培养液终止消化，将混合液以1 500 r/min离心10 min后弃去上清液，加入培养液混悬细胞沉淀，放置于37℃ 5%CO2培养箱中进行细胞培养。

1.2.2实验分组 空白组常规细胞培养48 h后换液，继续培养24 h；模型组常规细胞培养48 h后换液，采用6 MV-X线垂直照射，放射野为30 cm×30 cm，靶区照射剂量DT为200 cGy，以6 Gy作用心肌细胞，继续培养24 h；干预组根据当归红芪超滤物浓度的不同，分别加入含3 mg/ml(低剂量干预组)、6 mg/ml(中剂量干预组)和9 mg/ml(高剂量干预组)当归红芪超滤物至培养基中，培养48 h后换液，采用同模型组相同的X线进行照射，使用加入上述浓度当归红芪超滤物的培养基继续培养24 h。

1.3观察指标

1.3.1细胞活性检测 将心肌细胞以1×105个/ml接种于96孔培养板中，100 μl/孔，各组经过相应处理后，每孔加入100 μl 噻唑蓝(MTT)于37 ℃孵育4 h后，弃去培养液，然后每孔再加入150 μl二甲基亚砜(DMSO)，充分振荡使结晶物溶解。选择570 nm 波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔光吸收值(OD值)，计算生长抑制率 =(空白组 OD值-待检测组OD值)/ 空白组OD值 ×100%

1.3.2氧化应激指标检测 各组心肌细胞经过相应处理后，黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(SOD)含量，硫代巴比妥酸法检测丙二醛(MDA)含量，2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(LDH)含量，均严格按照试剂盒说明书进行操作，并通过分光光度计比色法进行检测。

1.3.3炎性因子指标检测 各组心肌细胞经过相应处理后，酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β水平，均严格按照试剂盒说明书进行操作。

1.4统计学方法 采用SPSS23.0软件进行正态性检验、符合正态分布的资料用均数±标准差表示，多组间数据采用方差分析进行比较，LSD-t检验进行两两比较。

2 结 果

2.1当归红芪超滤物对辐射致心肌细胞生长抑制率的影响 模型组OD值显著低于空白组(P<0.05)，说明模型组心肌细胞存活数量明显减少；各干预组心肌细胞生长抑制率均显著低于模型组(P<0.05)，且呈剂量依赖性(P<0.05)。见表1。

表1 当归红芪超滤物对辐射致心肌细胞生长抑制率的影响组别OD值生长抑制率(%)空白组0.-模型组0.)31.低剂量干预组0.)23.)中剂量干预组0.)16.)3)高剂量干预组0.)10.)3)4)F值53..686P值<0.001<0.001与空白组比较:1)P<0.05；与模型组比较:2)P<0.05；与低剂量干预组比较：3)P<0.05;与中剂量干预组比较：4)P<0.05；下表同

2.2当归红芪超滤物对辐射致心肌细胞氧化应激的影响 模型组心肌细胞SOD含量低于空白组，MDA和LDH含量高于空白组，差异均有统计学意义(P<0.05)；各干预组心肌细胞SOD含量均高于模型组，MDA和LDH含量均低于模型组，差异有统计学意义(P

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